不同肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建及对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.007

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 555-560.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.007

不同肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建及对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响

孙晓丽，李树峰，佟慧丽，张伟伟，殷红艳，严云勤^*

（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030）

收稿日期:2014-07-01 出版日期:2015-04-23 发布日期:2015-04-23
通讯作者: 严云勤，教授，博士生导师，主要从事动物转基因的研究，E-mail：yanyunqin@sohu.com
作者简介:孙晓丽（1988-），黑龙江齐齐哈尔人，硕士，主要从事分子克隆与细胞增殖的研究，E-mail：965080867@qq.com
基金资助:
国家转基因专项“高产优质转基因肉牛新品种培育”（2011ZX08007-002）

The Construction of Different Muscle-specific Promoter IGF2 Expression Vector and Its Impact on Bovine Skeletal Muscle Satellite Cell Proliferation

SUN Xiao-li，LI Shu-feng，TONG Hui-li，ZHANG Wei-wei，YIN Hong-yan，YAN Yun-qin^*

(College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China)

Received:2014-07-01 Online:2015-04-23 Published:2015-04-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在获得带有高效特异性启动子的IGF2表达载体，研究其对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。本研究将构建的3种含有IGF2肌肉特异性启动子的真核表达载体转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞，RT-PCR检测IGF2的相对表达量，从而筛选高效特异性的载体，并进行EdU试验及细胞周期相关基因RT-PCR检测。结果，成功构建了不同启动子desminpro、CMV-MyoGpro和MyoGpro-double表达IGF2的载体。RT-PCR检测结果表明，pGL3-desminpro-IGF2是较高效的并具有特异性的载体。载体转染体外培养细胞提高了细胞增殖速度，并上调了细胞周期相关基因CDK6和IGF2的表达。这为转基因肉牛的生产奠定了重要基础。

Abstract:

The aim of this study was to construct IGF2 expression vector with efficient and specific promoter and study its effects on bovine skeletal muscle satellite cell proliferation.The 3 eukaryotic expression vectors containing IGF2 and muscle-specific promoter were transfected into bovine skeletal muscle satellite cells and fetal fibroblasts，the relative expression of IGF2 was detected by RT-PCR to screen efficient and specific vector.EdU experiments were carried out and RT-PCR was used to detect the cell cycle-related genes.The different promoter （desminpro，CMV-MyoGpro and MyoGpro-double） IGF2 expression vectors were constructed successfully.The test results of RT-PCR showed that pGL3-desminpro-IGF2 was an efficient and specific vector.The vector transfected into cultured cell in vitro increased the speed of cell proliferation and up-regulated the expression of cell cycle-related genes，CDK6 and IGF2.The result has laid an important foundation for the production of transgenic bovine.

中图分类号:

S823
S813.3

孙晓丽，李树峰，佟慧丽，张伟伟，殷红艳，严云勤*. 不同肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建及对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(4): 555-560.

SUN Xiao-li，LI Shu-feng，TONG Hui-li，ZHANG Wei-wei，YIN Hong-yan，YAN Yun-qin. The Construction of Different Muscle-specific Promoter IGF2 Expression Vector and Its Impact on Bovine Skeletal Muscle Satellite Cell Proliferation[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(4): 555-560.

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